Différenciation

Pour les chercheurs intéressés à travailler avec des neurones dérivés d'iPSCs, la plateforme MNI iPSC/CRSPR existe pour vous fournir tous les outils et ressources nécessaires à votre projet afin d'éliminer le travail quotidien qu'exige la culture d'iPSCs. De plus, comme nous ne sommes pas à but lucratif, notre modèle existe pour récupérer les coûts nécessaires pour générer des progéniteurs neuronaux provenant d'iPSCs, ce qui nous permet de fournir nos services à prix abordables, avec des rabais supplémentaires entre 10-20% pour les projets en neurosciences au Québec.

Si vous êtes nouveau dans le cadre de la recherche d'iPSCs, nous pouvons vous offrir des progéniteurs neuronaux moteurs, corticaux, dopaminergiques et des astrocytes provenant d'iPSCs contrôles, de Parkinson (PD) et de la Sclérose Latérale Amyotrophique (SLA) disponibles au sein de la plateforme. De nouveaux protocoles sont actuellement en développment pour générer des oligodentrocytes, des microglies, des neurones sensoriels et GABAergiques. Veuillez vous renseigner si vous êtes intéressé par un sous-type neuronal non répertorié.

L'introduction du nouveau recueil MNI C-BIG, qui logera des données cliniques, génétiques, d'imageries, biologiques et des échantillons d'individus sains et de patients atteints de SLA, de PD et de déficiences intellectuelles, se développera au cours des 2 prochaines années. De plus, avec des types supplémentaires de progéniteurs neuronaux et iPSCs dans notre catalogue d'iPSCs, ces ressources sont mises à la disposition de tous les utilisateurs sur demande dans le cadre de notre initiative Open-Science. Si vous avez des cellules de patients et que vous souhaitez les mettre à la disposition de la plateforme pour la distribution dans le cadre de ce catalogue Open-Science, veuillez contacter Thomas Durcan pour plus d'informations.

Nous sommes également ouverts à travailler avec des chercheurs sur des projets personnalisés générant des progéniteurs pour d'autres sous-types neuronaux actuellement disponibles. Tous ces progéniteurs neuronaux peuvent être générés à partir de notre catalogue «interne» d'iPSCs ou de iPSCs personnalisés fournis par des utilisateurs qui souhaitent que nous générons des progéniteurs pour leurs lignées. Parallèlement, nous offrons également un service de projet personnalisé aux utilisateurs, où nous pouvons générer des neurones «internes» de nos progéniteurs issus de iPSCs qui peuvent être analysés en fonction des besoins de l'utilisateur (imagerie, purification d'ADN, purification de protéines). Les coûts seront déterminés en fonction des besoins globaux du projet.

Dans la maladie de Parkinson, les neurones dopaminergiques (DA) dans la substantia nigra sont progressivement perdues à mesure que la maladie progresse. Ces neurones DA constituent le système idéal pour comprendre les voies affectées dans cette maladie. Les PNDs sont dérivés soit par des corps embryoïdes, soit par une technique de monocouche, et dans les 2 semaines, plus de 60 à 70% de tous les neurones sont positifs pour le marqueur dopaminergique Tyrosine Hydroxylase (TH). Ces neurones peuvent être maintenus pendant 8 semaines dans des boîtes de Pétri ou sur des lamelles et ont démontré qu'ils possèdent une capacité de pacemaking à 4 semaines.

Il faut prévoir entre 2 à 3 mois pour générer plusieurs cryovials s'ils ne sont pas en réserve. Chaque vial est distribué avec un protocole détaillé pour la différenciation et la maintenance des neurones DA.

La SLA est une maladie neurodégénérative des motoneurones chez l'adulte. Ainsi, avoir des neurones moteurs humains pour étudier la maladie in vitro est essentiel pour notre compréhension des mécanismes de la maladie. Pour aider les chercheurs dans leurs études sur la SLA et tout autre trouble touchant les neurones moteurs, nous avons développé des MONs dans la plateforme pour développer les PNMs à partir d'iPSCs dans un délai de 18 jours. En 6 jours seulement, ces PNMs peuvent être différenciés en neurones moteurs immatures dont plus de 90% sont positifs pour le marqueur HB9. Ces neurones peuvent être maintenus jusqu'à 4 semaines in vitro, et de l'activité électrique peut être enregistrée dans les 2-3 semaines suivant la maturation. Ces PNMs sont obtenus à partir d'une monocouche.

Il faut prévoir de 2 à 3 mois pour générer plusieurs vials s'ils ne sont pas en réserve. Chaque vial est distribué avec un protocole détaillé pour la différenciation et la maintenance des neurones moteurs. 

De nombreux autres sous-types neuronaux peuvent être dérivés d'iPSCs et nous pouvons maintenant proposer des progéniteurs de neurones corticaux et des progéniteurs neuronaux pour générer des astrocytes. Des protocoles pour générer d'autres progéniteurs neuronaux sont en développement, y compris ceux pour les oligodendrocytes et les microglies. Les utilisateurs seront informés une fois que ces différents types de progéniteurs neuronaux seront disponibles.

Pour les utilisateurs qui ne s'intéressent pas aux progéniteurs neuronaux, mais cherchent des neurones matures pour leurs expériences, nous offrons également l'option d'un projet personnalisé. Avec des technologies biochimiques et d'imageries, nous pouvons visioner des neurones en direct ou par immunocytochimie avec des marqueurs d'intérêts pour l'utilisateur. Pour l'analyse biochimique, nous pouvons extraire l'ADN, l'ARN ou les protéines des neurones en fonction des besoins du projet. Selon les besoins du projet, celui-ci sera évalué au prix coûtant.

Veuillez contacter Thomas Durcan pour plus de détails.